【聚丙烯酰胺凝胶电泳】聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE）是一种广泛应用于生物化学和分子生物学领域的分离技术，主要用于分析蛋白质、核酸等大分子物质。该方法基于不同分子在电场作用下的迁移速度差异进行分离，具有分辨率高、操作简便、适用性强等特点。
一、技术原理
PAGE的基本原理是利用聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，在电场的作用下，带电粒子（如蛋白质或DNA）向相反电极移动。凝胶的孔径大小决定了分子的迁移速度，从而实现不同分子的分离。根据实验目的的不同，PAGE可以分为非变性PAGE和SDS-PAGE两种主要形式。
二、主要类型
| 类型 | 全称 | 特点 | 应用 |
| 非变性PAGE | Native PAGE | 保持蛋白质天然结构 | 分析蛋白质复合物、酶活性 |
| SDS-PAGE | Sodium Dodecyl Sulfate-PAGE | 蛋白质变性并带上负电荷 | 分子量测定、蛋白质纯度分析 |
三、实验步骤
1. 制备凝胶：将丙烯酰胺和交联剂（如N,N'-亚甲基双丙烯酰胺）溶解于缓冲液中，加入催化剂引发聚合。
2. 样品处理：根据实验要求对样品进行处理（如加入SDS、还原剂等）。
3. 上样：将处理后的样品加入凝胶孔中。
4. 电泳：接通电源，使样品在凝胶中迁移。
5. 染色与观察：使用考马斯亮蓝、银染等方法显影，通过紫外灯或肉眼观察分离结果。
四、优点与局限性
| 优点 | 局限性 |
| 分辨率高，可分离小至几kDa的分子 | 操作相对复杂，需精确控制条件 |
| 适用于多种生物大分子 | 凝胶易破裂，需小心操作 |
| 可结合其他技术（如Western blot） | 成本较高，耗时较长 |
五、应用领域
- 蛋白质研究：用于鉴定、定量、纯化及功能分析。
- 基因组学：在DNA片段分析、PCR产物检测中广泛应用。
- 临床诊断：如血清蛋白分析、免疫球蛋白分型等。
- 法医学：DNA指纹图谱分析。
通过合理选择实验条件和优化操作流程，聚丙烯酰胺凝胶电泳能够为科学研究提供可靠的分子分离手段，是现代生命科学实验室不可或缺的重要工具之一。